沉降菌測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、菌落：細(xì)菌培養(yǎng)后，由一個(gè)或幾個(gè)細(xì)菌繁殖而形成的一細(xì)菌集落，簡(jiǎn)稱CFU。通常用個(gè)數(shù)表示。

2、測(cè)試方法：沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)48小時(shí)以上培養(yǎng)，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落數(shù)，來評(píng)定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評(píng)定無塵室的潔凈度。

3、所用的儀器和設(shè)備

1）高壓消毒鍋：使用時(shí)參照文件GZ-ZL-SOP-066-00進(jìn)行操作。

2）恒溫培養(yǎng)箱：必須定期對(duì)培養(yǎng)箱的溫度計(jì)進(jìn)行檢定。

3）培養(yǎng)皿：一般采用中90mm×15mm硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。使用前將培養(yǎng)皿置于121℃濕熱滅菌20分鐘。

4、培養(yǎng)基：普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。將培養(yǎng)基加熱熔化，冷卻至約45℃在無菌操作條件下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿約15m1。待瓊脂培養(yǎng)基凝固后，將培養(yǎng)基平皿放入30～35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)數(shù)小時(shí)，若培養(yǎng)基平皿上確無菌落生長(zhǎng)，即可供采樣用，制備好的培養(yǎng)基平皿應(yīng)在2～8℃的環(huán)境中存放。

5、測(cè)試步驟

1）采樣方法：將已制備好的培養(yǎng)皿放置在預(yù)先確定的取樣點(diǎn)，打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露0.5小時(shí)，再將培養(yǎng)皿蓋上蓋后倒置。
2）培養(yǎng)，時(shí)間不少于48小時(shí)。每批培養(yǎng)基應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)，檢查培養(yǎng)基本身是否污染，可每批選定3只培養(yǎng)皿作對(duì)照培養(yǎng)。

3）菌落計(jì)數(shù)：用肉眼直接計(jì)數(shù)，然后用5～10倍放大鏡檢查，有否遺漏。若培養(yǎng)皿上有2個(gè)或2個(gè)以上菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上的菌落計(jì)數(shù)。

6、注意事項(xiàng)

1）測(cè)試用具要做滅菌處理，以確保測(cè)試的可靠性、正確性。

2）采取一切措施防止人為對(duì)樣本的污染。

3）對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細(xì)的記錄。

4）由于細(xì)菌種類繁多，差別甚大，計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察，不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長(zhǎng)的菌落，并須注意細(xì)菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時(shí)用顯微鏡鑒別。

5）采樣前應(yīng)仔細(xì)檢查每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。

7、測(cè)試規(guī)則

1）測(cè)試狀態(tài)

（1）沉降菌測(cè)試前：被測(cè)試無塵室（區(qū)）的溫濕度須達(dá)到規(guī)定的要求，靜壓差、必須控制在規(guī)定值內(nèi)。被測(cè)試無塵室（區(qū)）已消毒。

（2）測(cè)試狀態(tài)有靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種，并在報(bào)告中注明測(cè)試狀態(tài)。

（3）測(cè)試人員：測(cè)試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級(jí)別的工作服。靜態(tài)測(cè)試時(shí)，室內(nèi)測(cè)試人員不得多于2個(gè)人。

2）測(cè)試時(shí)間

（1）對(duì)單向流，如100級(jí)凈化房間內(nèi)及層流工作臺(tái)，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于10分鐘后開始。

（2）對(duì)非單向流，如10000級(jí)、100000級(jí)以上的凈化房間，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30分鐘開始。

8沉降菌計(jì)數(shù)
1）最少采樣點(diǎn)數(shù)目：可按表1確定。在滿足最少測(cè)點(diǎn)數(shù)的同時(shí)，還宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)，見表2。??表1最少采樣點(diǎn)數(shù)目

注：表中的面積對(duì)于單向流無塵室是指送風(fēng)面積，對(duì)于非單向流無塵室是指房間面積。?????????表2最少培養(yǎng)皿數(shù)

2）采樣點(diǎn)的布置：工作區(qū)測(cè)試點(diǎn)位置離地0.8～1.5m左右（略高于工作面）?？稍陉P(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測(cè)點(diǎn)，采樣點(diǎn)的布置應(yīng)力求均勻，避免采樣點(diǎn)在某 局部區(qū)域過于集中，某局部區(qū)域過于稀疏。

3）記錄：測(cè)試報(bào)告中應(yīng)記錄房間溫度、相對(duì)濕度、壓差、測(cè)試狀態(tài)及測(cè)試數(shù)據(jù)。

4）結(jié)果計(jì)算：用計(jì)數(shù)方法得出各個(gè)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。平均菌落數(shù)的計(jì)算見下式：m1+m2+……+mn

平均菌落數(shù)m=n

式中：m為平均菌落數(shù)；m1為1號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)；m2為2號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)；mn為n號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)；n為培養(yǎng)皿總數(shù)。

5）結(jié)果評(píng)定：用平均菌落數(shù)判斷無塵室的空氣中的微生物。

6）無塵室（區(qū)）內(nèi)的平均菌落數(shù)必須低于所選定的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)（見表3）。????????????????????表3

7）若某無塵室（區(qū)）的平均菌落數(shù)超過評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，則必須對(duì)此區(qū)域先行消毒，然后重新測(cè)試兩次，測(cè)試結(jié)果必須合格。

主要參考文獻(xiàn)：國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 16294-1996